Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 8683-16:2017 quy định quy trình giữ giống vi rút Gumboro nhược độc chủng 2512 dùng trong sản xuất và kiểm nghiệm thuốc thú y. Đây là văn bản kỹ thuật quan trọng nhằm đảm bảo tính ổn định, độ thuần khiết và hoạt lực của chủng vi rút giống qua các thế hệ bảo quản.

Phạm vi áp dụng của tiêu chuẩn

• Tiêu chuẩn này quy định chi tiết quy trình giữ giống, kiểm tra chất lượng và bảo quản giống vi rút Gumboro nhược độc chủng 2512.
• Đối tượng áp dụng bao gồm các cơ sở sản xuất, kiểm nghiệm, nghiên cứu và lưu giữ giống vi sinh vật thú y trên phạm vi cả nước.

Yêu cầu về thiết bị, dụng cụ và nguyên liệu

• Thiết bị chuyên dụng: Hệ thống tủ ấm nuôi cấy, tủ lạnh sâu (nhiệt độ duy trì từ âm 70 độ C trở xuống), máy đông khô chuyên dụng, bình chứa nitơ lỏng, kính hiển vi quang học và các dụng cụ vô trùng phục vụ cho việc nuôi cấy, thu hoạch vi rút.
• Nguyên liệu sinh học: Trứng gà có phôi đạt tiêu chuẩn SPF (sạch mầm bệnh cụ thể) hoặc trứng gà sạch mầm bệnh từ 9 ngày tuổi đến 11 ngày tuổi, hoặc các dòng tế bào cảm nhiễm phù hợp để nhân lên vi rút Gumboro chủng 2512.
• Hóa chất và môi trường: Các dung dịch đệm tiêu chuẩn, môi trường nuôi cấy tế bào, chất bảo quản đông khô đạt tiêu chuẩn chất lượng dùng trong phòng thí nghiệm thú y.

Quy trình nhân giống và thu hoạch vi rút Gumboro chủng 2512

• Chuẩn bị phôi trứng hoặc tế bào: Tiến hành soi trứng để kiểm tra độ an toàn, sự phát triển của phôi gà và xác định vị trí tiêm cấy thích hợp.
• Tiêm cấy vi rút giống: Thực hiện tiêm vi rút Gumboro chủng 2512 vào màng niệu (CAM) hoặc xoang niệu của phôi trứng gà, hoặc gây nhiễm trực tiếp lên thảm tế bào một lớp đã chuẩn bị sẵn.
• Nuôi ủ hệ thống: Nuôi ủ phôi trứng hoặc tế bào ở nhiệt độ tiêu chuẩn (từ 37 độ C đến 38 độ C) và theo dõi hàng ngày để phát hiện, ghi nhận các bệnh tích đặc trưng do vi rút Gumboro gây ra.
• Thu hoạch sản phẩm: Thu hoạch dịch nổi, màng niệu hoặc phôi trứng bị bệnh tích sau thời gian nuôi cấy quy định, tiến hành loại bỏ các mẫu bị nhiễm tạp khuẩn hoặc không đạt các chỉ tiêu cảm quan ban đầu.

Tiêu chuẩn kiểm tra chất lượng giống vi rút sau thu hoạch

• Kiểm tra độ thuần khiết: Giống vi rút sau khi thu hoạch phải đảm bảo vô trùng tuyệt đối, không bị nhiễm vi khuẩn, nấm mốc, mycoplasma hoặc các loại vi rút ngoại lai khác.
• Kiểm tra tính đặc hiệu (định danh): Sử dụng các phản ứng huyết thanh học đặc hiệu như phản ứng trung hòa, phương pháp ELISA hoặc áp dụng kỹ thuật sinh học phân tử (PCR) để xác định chính xác chủng vi rút Gumboro 2512.
• Kiểm tra hoạt lực (hiệu giá): Xác định hiệu giá vi rút (thông qua chỉ số EID50 hoặc TCID50) để đảm bảo đạt tiêu chuẩn tối thiểu theo quy định đối với giống dùng trong sản xuất vắc xin.
• Kiểm tra tính an toàn: Thử nghiệm trực tiếp trên động vật thí nghiệm (gà nhạy cảm) để xác định tính nhược độc, đảm bảo giống không gây bệnh hoặc gây chết cho động vật kiểm nghiệm.

Phương pháp bảo quản và lưu giữ giống

• Bảo quản bằng phương pháp đông khô: Vi rút sau khi bổ sung chất bảo vệ đông khô phù hợp được tiến hành đông khô, đóng kín dưới áp suất chân không hoặc nạp khí nitơ, bảo quản ổn định ở nhiệt độ từ 2 độ C đến 8 độ C hoặc âm 20 độ C.
• Bảo quản ở nhiệt độ siêu sâu: Lưu giữ giống trong các ống cryotube chuyên dụng ở nhiệt độ âm 70 độ C hoặc bảo quản trong môi trường nitơ lỏng (âm 196 độ C) để duy trì hoạt lực tối ưu trong thời gian dài.
• Quản lý hồ sơ giống: Thiết lập và lưu trữ hồ sơ theo dõi chi tiết cho từng lô giống, bao gồm thông tin về nguồn gốc, số đời tiếp đời (passage), kết quả kiểm nghiệm các chỉ tiêu chất lượng, ngày sản xuất và điều kiện bảo quản thực tế.